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本制品是根据现行国标GB/T30990-2014的方法开发的，适用于动植物、微生物和培养细胞样品中的溶菌酶活性检测的试剂盒。

溶菌酶（Lysozyme，LZM，EC3.2.1.17）又叫胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，它能催化细菌细胞壁多糖的水解，从而溶解细菌的细胞壁，起到杀死细菌的作用。溶菌酶广泛存在于人体、动物、植物和微生物中，因此溶菌酶活性具有重要的意义。

利用溶菌酶可水解溶壁微球菌（Micrcoccus lysodikticus）的细胞壁导致菌悬液的浊度降低，继而导致450nm吸光光度值的变化来测定酶活力。

• 即开即用，用户不用单独准备各种试剂，操作简单。
  
• 根据国标GB/T30990-2014设计。
  
• 本试剂盒1个溶菌酶活性单位的定义是在25℃，每分钟使450nm吸光度值减少0.001的酶量。

• 待测样本制备
  
  • 液体样品的：澄清的液体可以直接检测，若浑浊则可以离心后取上清液直接检测。为了计算酶的比活，需要用自备方法测定待测样本总蛋白浓度。
    
  • 组织样本：取约0.1g组织，加入1mL生理盐水，进行冰浴匀浆。4℃ 12000rpm离心10分钟，取上清，置冰上待测。为了计算酶的比活，需要用自备方法测定待测样本总蛋白浓度。
• 测定步骤
  
  • 分光光度计预热30分钟以上，设定温度25℃，调节波长至450nm处，用自备的蒸馏水调零。
    
  • 在预热期间，新鲜配制溶菌酶活性检测底物工作液（以下简称底物工作液）。先根据待测样本数计算出所需底物工作液的体积[每个样本需要2.5mL，则N个样本则需要2.5mL×(2N+2)]。下面以制备20mL底物工作液为例：小心称取10mg底物干粉到适当塑料瓶中，加入20mL溶菌酶活性测定底物重悬液（以下简称底物重悬液）后，涡旋振荡至底物干粉全部重悬，测定A_450nm。再用底物重悬液将其稀释到A_450nm为0.7，此溶液即为底物工作液，放25℃预热待用。同时需要将底物重悬液放25℃预热待用。
    
  • 在预热期间，配制待测样品。用底物重悬液稀释待测样品至适当浓度，放冰上待用（为避免残留蛋白酶的降解，最好不要25℃预热待用）。最适浓度为能使反应体系每分钟A_450nm降低0.02～0.04的浓度。首次测定不知道最适浓度时，可以先预实验，把样本稀释到不同的浓度同时测定，确定最适浓度范围。
    
  • 如果有N个待测样本，每个样本做两个平行测试，则准备2N+2只试管，多出的两只为空白。在25℃恒温条件下，按下表操作步骤加入各试剂，反应总体积为3mL。
    

    成分	2个空白管	2N个样品管
    25℃预热的底物工作液	2.5mL	各2.5mL
    25℃预热的底物重悬液	0.5mL	不加
    N个待测样品	不加	各0.5mL

  • 加入0.5mL待测样本后，迅速混匀，然后取3mL加入到比色皿中，每隔30秒读取吸光度值（A），共读3分钟。以A对时间作图，取反应最初线性部分，计算出每分钟A的减少值（△A/分钟）为ΔA_450nm/分钟=ΔA _{样品/分钟}-ΔA _{空白/分钟}。
    
  • 溶菌酶总活性计算：由于1个溶菌酶活性单位定义为在25℃，每分钟使450nm吸光度值减少0.001的酶量，故待测样本含有的溶菌酶总活性单位=ΔA_450nm/分钟÷0.001。
    
  • 溶菌酶比活性计算：待测样本的溶菌酶比活性=待测样本中溶菌酶的总活性单位÷待测样本总蛋白量，总蛋白量=待测样本蛋白浓度（第1和第2步）×待测样本体积0.5mL。